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產(chǎn)品名稱：腸癌3D類器官培養(yǎng)基（Intestine Carcinoma Organoid Medium）
產(chǎn)品說明：腸癌3D類器官培養(yǎng)基（Intestine Carcinoma Organoid Medium）是一種為促進人源腸癌類器官體外形成和擴增而開發(fā)的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基的*配方可以提供一個理想人源腸癌類器官體外培養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進體外人源腸癌類器官的生長。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴增
(3) 保持腫瘤特征
(4) 藥敏結(jié)果與臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明：
?實驗前準(zhǔn)備
（1）15mL無菌離心管、1.5mL離心管、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30 min。
（2）提前30min從4℃冰箱取出腸癌類器官培養(yǎng)基平衡至室溫，提前1h從-20℃冰箱取出所需體積的基質(zhì)膠冰上融化。
?食管癌類器官培養(yǎng)
（1）將獲取的腸癌原代細(xì)胞懸液計數(shù)，根據(jù)計算好的體積吸取細(xì)胞懸液加入預(yù)冷的1.5mL離心管中，補齊預(yù)冷的腸癌類器官培養(yǎng)基至所需體積。
（2）將預(yù)冷后的細(xì)胞懸液加入等體積的基質(zhì)膠中輕輕混勻（全程冰上操作），避免氣泡，使腸癌原代細(xì)胞終濃度為5× 105個細(xì)胞/量升。然后將細(xì)胞與基質(zhì)膠的混合液按照50uL/孔呈半球形點膠干24孔板。
（3）將培養(yǎng)板放入5%CO2 37℃培養(yǎng)箱終至少30min，待基質(zhì)膠*凝固。沿孔壁每孔緩慢加入500μL預(yù)先恢復(fù)至室溫的類器官培養(yǎng)基，放置5%CO2、37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
（4） 3天后鏡下觀察類器官形成情況粒徑大于30~50μm即認(rèn)為類器官已經(jīng)形成。
（5）每5天更換一次培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，持續(xù)觀察類器官大小，鏡下觀察大部分類器官大小均大于30~50μm且大小不再增大即可收集類器官進行后續(xù)實驗。
?食管癌類器官收集
（1）棄培養(yǎng)基，每孔加入200μL基質(zhì)膠解離試劑，室溫放置1min，輕輕吹打混勻，收集至15mL離心管中。
（2）50rpm恒溫震蕩解離10-20min，解離之后1500rpm離心3min，輕吸去上清，待用。
?食管癌類器官傳代
（1）收集的類器官，加入適量的消化酶，37℃，200rpm消化（具體時間根據(jù)類器官大小和數(shù)量決定，以肉眼可見顆粒明顯減小一半為準(zhǔn)，可中間取消化的類器官顯微鏡觀察，類器官消化至3~10個細(xì)胞集合體理想）。
（2）消化*后1500rpm離心3min，棄上清，使用清洗液重懸后1500rpm離心3min;加入預(yù)冷的腸癌類器官培養(yǎng)基進行重懸，計數(shù)，按照培養(yǎng)步驟操作繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項：
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.樣本需為腫瘤組織，且腫瘤細(xì)胞比例越高（>50%），類器官培養(yǎng)成功率越高。3.使用產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作，避免污染。
4.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。5.類器官培養(yǎng)過程要輕柔，避免基質(zhì)膠凝固后散膠。
6.請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。
7.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。
